Tο Bile Αesculin Agar χρησιμοποιείται για την διαφοροποίηση μεταξύ των στρεπτοκόκκων της ομάδας D και των σταφυλοκόκκων της ίδιας ομάδας. Οι στρεπτόκοκκοι (συμπεριλαμβανομένων και των εντεροκόκκων) υδρολύουν την γλυκοζυλιωμένη εσκουλίνη σε εσκουλετίνη και δεξτρόζη. Η εσκουλετίνη αντιδρά με άλατα σιδήρου παράγοντας σκούρο καφέ ή μαύρο χρώμα στο υλικό. Ο κιτρικός σίδηρος λειτουργεί ως δείκτης της υδρόλυσης της εσκουλίνης και του σχηματισμού της εσκουλετίνης. Η χολή βοός αναστέλλει τα Gram (+) βακτήρια, εκτός των εντεροκόκκων.
